全套操作约需1小时,包括匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤,具体说明如下。

匀浆和细胞裂解
在提取基因组DNA时,所使用的匀浆步骤因实验材料的不同而有所区别。以下是具体操作方法:
从动物组织中提取基因组DNA
使用研钵进行匀浆时:
- 将1~100mg的动物或人组织放入冰浴预冷的研钵中,快速且用力地研磨成匀浆。
注意:对于富含DNA酶的组织(如胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等)或富含胶原蛋白(如皮肤、肌腱等),以及坚硬的组织(如骨骼),请先将其研磨至粉末状,且需加液氮。 - 加入650μl的SolutionA和9μl的RNaseA1,温和研磨30秒。
注意:处理上述组织时,加入SolutionA和RNaseA1后要将研钵置于65℃水浴中研磨1分钟。 - 将650μl的匀浆液转移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650μl,需补充SolutionA至650μl,并在65℃下保温5分钟。
植物材料或植物培养细胞中的基因组DNA提取
选择适量的新鲜植物材料(如冷冻干燥材料用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮后研磨至粉末状。请间断添加液氮以防样品融化。
植物材料使用量表
- 植物花、叶片:10~100mg
- 植物茎:60~240mg
- 植物根:80~240mg
- 植物种子:80~240mg
对于基因组DNA含量较低的样品(如根、种子),请增大用量,并分管操作,最后将所有管的溶液合并至同一Spin Column中过滤。
全血中提取基因组DNA
- 取10~250μl的全血(含抗凝剂)放入Collection Tube中。
- 加入500μl的SolutionA。
- 加入1μl的RNaseA1,搅拌15秒后置于冰浴中5分钟。
注意:每次处理的人或动物抗凝全血量不超过250μl。
培养细胞中提取基因组DNA
使用悬浮培养的动物细胞时:
- 收集1×105~1.5×107的细胞,5,000rpm离心5分钟,弃去上清。
- 加入150μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
- 加入500μl的SolutionA和8μl的RNaseA1,激烈搅拌15秒后,静置1分钟。
通过尊龙凯时的综合方案,可以有效提升基因组DNA的提取效率,确保实验结果的可靠性与准确性,为生物医学研究提供强有力的支持。